化工学报 ›› 2008, Vol. 59 ›› Issue (12): 3101-3106.
宋占科;王小艳;陈国强;李春
SONG Zhanke;WANG Xiaoyan;CHEN Guoqiang; LI Chun
摘要:
产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6 mg8226;L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368 U8226;mg-1。