摘要:
培养定向进化后的质粒保藏菌E. coli BL21(DE3)pLysS /PET-15b-dhaT’-24 并进行质粒抽提,将抽提的质粒转化入感受态宿主细胞E. coli BL21(DE3)pLysS中得产1,3-丙二醇氧化还原酶的工程菌。工程菌经乳糖诱导后进行发酵培养获得酶活为182 U/mL的1,3-丙二醇氧化还原酶,最适反应pH值为10,pH值稳定范围为7.0~9.0,最适反应温度为55 ℃,温度稳定范围为30~45 ℃。利用工程菌产的1,3-丙二醇氧化还原酶进行转化3-羟基丙醛为1,3-丙二醇的反应,同时偶联甘油脱氢酶(由另一工程菌制备)转化甘油的反应进行辅酶NADH的再生,实现了1,3-丙二醇的双酶耦合的连续反应。由于来源于工程菌的双酶酶学性质相适应,反应连续进行34 h后,底物3-羟基丙醛的转化率达63.4%,产物1,3-丙二醇的产率达64.6%。
彭益强1,庄 园1,林志强1,黄文爱1,方柏山1,2. 工程菌发酵产酶及其在1, 3-丙二醇耦合酶催化制备中的应用 [J]. CIESC Journal.
PENG Yiqiang1,ZHUANG Yuan1,LIN Zhiqiang1,HUANG Wenai1,FANG Baishang1,2. Enzyme from engineering strain and application in 1, 3-propanediol coupling-enzymatic catalysis[J]. .